检索
E-mail
RSS

作者投稿 主编审稿 专家审稿 远程编辑

热带海洋学报 >

2024 , Vol. 43 >Issue 2: 59 - 68

DOI: https://doi.org/10.11978/2023090

海洋生物学

广西北部湾海域织锦巴非蛤精巢发育、精子发生及超微结构研究

  • 徐炳杰 , 1, 2 ,
  • 刘一鸣 1, 2 ,
  • 邢清淦 1, 2 ,
  • 连昌朋 1, 2 ,
  • 吴韬 1, 2 ,
  • 潘英 , 1, 2
展开
  • 1.广西大学动物科学技术学院, 广西 南宁 530004
  • 2.广西高校水生生物健康养殖与营养调控重点实验室, 广西 南宁 530004
潘英, 女, 教授, 博士生导师。email:

徐炳杰(1997—), 男, 广西梧州市人, 硕士研究生, 从事海洋贝类遗传与育种研究。email:

Copy editor: 殷波

收稿日期: 2023-06-30

  修回日期: 2023-08-22

  网络出版日期: 2023-08-29

基金资助

广西创新驱动发展专项(Guike AA19254032)

收起

Spermary development, spermatogenesis and sperm ultrastructure of Paphia textile in the Beibu Gulf, Guangxi

  • XU Bingjie , 1, 2 ,
  • LIU Yiming 1, 2 ,
  • XING Qinggan 1, 2 ,
  • LIAN Changpeng 1, 2 ,
  • WU Tao 1, 2 ,
  • PAN Ying , 1, 2
Expand
  • 1. College of Animal Science and Technology, Guangxi University, Nanning 530004, China
  • 2. Key Laboratory of Aquatic Healthy Breeding and Nutrition Regulation of Guangxi Universities, Nanning 530004, China
PAN Ying. email:

Copy editor: YIN Bo

Received date: 2023-06-30

  Revised date: 2023-08-22

  Online published: 2023-08-29

Supported by

Guangxi Innovation Driven Development Project(Guike AA19254032)

Fold

摘要

为了解广西北部湾海域织锦巴非蛤(Paphia textile)精巢发育、精子发生及成熟精子的超微结构, 文章采用解剖观察、精巢组织切片、扫描和透射电镜技术进行了研究。结果表明, 所采集织锦巴非蛤中未发现雌雄同体, 观察的个体皆为雌雄异体, 将其精巢发育划分为增殖期、生长期、成熟期、排放期、休止期5个时期, 织锦巴非蛤精巢成熟与排放期在9 月—翌年1月。精子发生分为精原细胞期、初级精母细胞期、次级精母细胞期、精细胞期、成熟精子期5个时期。织锦巴非蛤成熟精子由头部、中部和尾部组成, 为典型的鞭毛型精子, 全长约为46.04μm。精子头部分为顶体和精核, 顶体为圆锥形, 精核呈长圆柱形, 前端直径约为0.71μm, 后端直径约为1.34μm; 中部由4个环绕成瓣状的线粒体与2个相互垂直的近、远端中心粒组成; 尾部鞭毛长约38.8μm, 直径约为0.21μm, 外被质膜, 为典型“9+2”双联体微管结构。研究结果为织锦巴非蛤的繁殖生物学、人工苗种繁育及种质资源保护提供研究基础。

关键词： 织锦巴非蛤; 精巢发育; 精子发生; 超微结构; 组织切片

本文引用格式

徐炳杰 , 刘一鸣 , 邢清淦 , 连昌朋 , 吴韬 , 潘英 . 广西北部湾海域织锦巴非蛤精巢发育、精子发生及超微结构研究[J]. 热带海洋学报, 2024 , 43(2) : 59 -68 . DOI: 10.11978/2023090

Abstract

In this study, anatomical observation, spermary tissue section, scanning and transmission electron microscopy techniques were used to study the spermary development, spermatogenesis and ultrastructure of mature sperm of Paphia textile in Beibu Gulf of Guangxi. The results showed that no hermaphrodites were found in the collected samples, and all the observed individuals were dioecious. The spermary development of P. textile was divided into five main stages: proliferating stage, growing stage, maturing stage, spawning stage, and resting stage. The maturing stage and spawning stage of P. textile was from September to January of the following year. Sperm development is divided into five stages: spermatogonia stage, primary spermatocyte stage, secondary spermatocyte stage, spermatid stage and mature sperm stage. The mature sperm of P. textile consisting of the head, middle and tail, overall length approximately 46.04 μm. The sperm head is divided into the acrosome and the nucleus. The acrosome is conical in shape and the nucleus is long and cylindrical. The anterior end was 0.71 μm in diameter and the posterior end was about 1.34 μm in diameter. The middle part consisted of four mitochondria encircled in a circular shape and two mutually perpendicular proximal and distal centrioles. The tail flagellum was about 38.8 μm long and 0.21 μm in diameter, and the external plasma membrane was covered with a typical “9 + 2” duplex microtubule structure. The results of this study provide basic research information for the reproductive biology, artificial seed breeding and germplasm resource conservation of P. textile.

Key words： Paphia textile; spermary development; spermatogenesis; ultrastructural; histological section

织锦巴非蛤(Paphia textile)俗称“花甲王”, 隶属软体动物门(Mollusca)、瓣鳃纲(Lamellibranchia)、帘蛤目(Veneroida)、帘蛤科(Veneridae)、巴非蛤属(Paphia), 为埋栖型双壳贝类, 在中国、菲律宾以及马来西亚等均有分布, 国内在广西、广东、海南等有分布(徐凤山 等, 2008), 是北部湾海域重要的经济海产贝类之一。织锦巴非蛤壳形长、后背缘微凸, 表面布满网状褐色花纹, 与同为帘蛤科巴非蛤属的波纹巴非蛤(Paphia undulata)贝壳外观十分相似, 但织锦巴非蛤贝壳更厚, 个体更大(庄启谦, 2001)。织锦巴非蛤因其个体大、味道鲜美、市场价格较高等优点, 养殖和消费市场十分广阔。目前对广西北部湾海域织锦巴非蛤进行大量捕捞, 导致其野生资源急剧减少。同时, 织锦巴非蛤养殖规模较小, 自然资源短缺, 且相关研究较少, 影响了其产业的进一步发展。目前国内关于织锦巴非蛤的研究集中在养殖生态(栗志民 等, 2011; 吴加莹 等, 2023)、形态性状(赖胜琪 等, 2022; 翟子钦 等, 2022)、转录组与分子标记(Chen et al, 2016)、摄食与营养(邓正华 等, 2022)、苗种培育及养殖(邹杰 等, 2019; 刘海娟 等, 2022)、繁殖生物学(Chen et al, 2021; 徐炳杰 等, 2023)等方面。
双壳贝类精子的形态结构在不同属种之间表现出一定差异, 可为贝类分类和亲缘关系研究提供重要依据(Campos et al, 2020)。精细胞作为配子发生的阶段, 探究其发生和形成过程对了解贝类精子发生机制有着重要意义。双壳贝类的精子发生是其繁殖生物学重要内容, 成熟精子形态结构反映了其物种进化地位, 同时也是种内与种间区分的重要依据(竺俊全 等, 2002)。自20世纪60年代Galtsoff等(1960)首次对美洲牡蛎(Crassostrea virginica)成熟精子进行扫描和透射电镜观察, 此后扫描和透射电镜观察成为研究双壳贝类生殖细胞发生及其超微结构的重要手段。目前国内外学者对海产双壳贝类精巢发育、精子发生及超微结构已有不少研究。黄瑞等(2011)研究表明近江蛏(Sinonovacula rivularis)和缢蛏(Sinonovacula constricta)的精子顶体均为保龄球状, 两者的精子形态与结构属于种内差异。连昌朋等(2022)报道了钝缀锦蛤(Tapes conspersus)的精子由头部、中部、尾部 3 个部分构成, 精子顶体为倒“V”形, 同时尾部存在双尾结构。郭云鹏等(2020)研究表明红树蚬(Polymesoda erosa)成熟精子头部、中部和尾部构成, 精子顶体为倒“V”形, 精核内存在泡状结构。叶婧等(2012)报道了魁蚶(Scapharca broughtoni)的精子属原生型, 其顶体物质的合成始于初级精母细胞期, 同时精核在精子发生过程中形态变化不大等问题。目前对于织锦巴非蛤的精巢发育、精子发生及超微结构研究尚未见报道。因此, 本文通过精巢组织切片、扫描和透射电镜等技术手段对织锦巴非蛤的精巢发育、精子发生及超微结构展开研究, 旨在为织锦巴非蛤繁殖生物学、人工育苗、养殖及种质资源保护提供基础资料。

1 材料与方法

1.1 材料

2020年11月—2021年10月, 织锦巴非蛤采集于广西北部湾防城港海域野生群体, 每月采集活力较好、壳形正常、无损伤的20个个体。一年内采样总数为240个, 雌性占比为52.78%, 雄性占比47.22%。未发现雌雄同体的个体。所采集织锦巴非蛤的形态参数见表1。
表1 织锦巴非蛤形态参数

Tab.1 Morphological parameters of P. textile

参数 壳长/mm 壳宽 /mm 壳高/mm 体质量/g 软体质量/g
平均值±标准差 62.73±5.39 23.45±2.62 36.90±3.41 40.05±11.90 8.59±2.99
最大值 73.97 27.03 42.05 67.89 11.14
最小值 52.10 16.60 29.32 20.45 4.16

1.2 方法

1.2.1 样本测量

数显游标卡尺(精度为0.02mm)分别测量织锦巴非蛤壳长、壳宽、壳高; 电子天平(精度为0.01g)称量织锦巴非蛤的体质量、软体质量。肥满度的计算公式是: 肥满度=软体重/体质量×100%。用Image J图像分析软件对成熟精子全长、精核等进行长度测量。

1.2.2 组织切片制作与观察

对每个月采集的样本测量后进行解剖观察, 剪刀和镊子剪取2~3g精巢组织, 放入Bouin’s液在常温下固定24h, 送往广西医科大学医学实验中心进行制样。制样步骤首先用70%酒精置换Bouin’s液, 然后用70%、80%、95%和100%的酒精依次进行2次梯度脱洗, 脱水后的精巢组织先放入无水乙醇与二甲苯混合溶液, 30min后放入二甲苯溶液。采用石蜡渗透包埋, 切片厚度为4~6μm、苏木精-伊红(H-E)染色、中性树脂封片。尼康显微镜(Nikon Eclipse E 100,日本)和奥林巴斯正置生物显微镜(Olympus BX63, 日本)进行组织切片观察并拍照。

1.2.3 扫描电镜制样与观察

用巴氏吸管吸取织锦巴非蛤成熟精巢组织中的精细胞, 再放入10mL海水中进行稀释, 混匀后吸取1mL放入5mL EP管内, 加入电镜固定液(2.5%戊二醇)固定2h, 4℃冰箱中保存过夜, 次日再吸取2.5mL上清液放入新EP管, 加入电镜固定液, 送至武汉赛维尔生物科技有限公司进行后续制样。后续制样用磷酸缓冲液(0.1mol·L-1)漂洗、酒精脱水、乙酸戊脂进行置换。冷冻干燥仪进行干燥, 离子溅射仪喷金, 日立6308-LV型扫描仪(日立6308-LV型, 日本)观察并拍照。

1.2.4 透射电镜制样与观察

剪取雄性织锦巴非蛤精巢组织约1~2g, 放入电镜固定液(2.5%戊二醇), 室温下固定2h, 4℃冰箱保存过夜, 次日将精巢组织切成1mm3小块, 加入电镜固定液(2.5%戊二醇), 送至武汉赛维尔生物科技有限公司后续制样。后续制样用PB磷酸缓冲液(pH=7.4)漂洗样品3次, 1%锇酸固定2h, 随即用酒精-丙酮溶液依次进行梯度脱水和漂洗。采用Epon812环氧树脂进行渗透、包埋, 超薄切片机(Leica UC7型, 德国)切片, 醋酸铀饱和枸橼酸铅溶液进行双重染色, 透射电子显微镜(日立HI7800型, 日本)进行观察并拍照。

2 结果与分析

2.1 织锦巴非蛤的精巢发育分期

参考其他贝类精巢发育分期结果, 结合织锦巴非蛤精巢组织切片观察的精细胞发育规律、不同发育时期精细胞、精子等在滤泡中所占比例、结缔组织占比面积等相关特点, 将织锦巴非蛤精巢发育分期划分为Ⅰ期(增殖期)、Ⅱ期(生长期)、Ⅲ期(成熟期)、Ⅳ期(排放期)、Ⅴ期(休止期) 5个时期, 各期形态如图1。
图1 织锦巴非蛤精巢不同发育时期的组织切片

a. 增殖期; b. 生长期; c. 成熟期; d. 排放期; e. 休止期

Fig. 1 Histological section of different spermary development stages in P. textile.

(a) Proliferating stage; (b) Growing stage; (c) Maturing stage; (d) Spawning stage; (e) Resting stage

2.1.1 Ⅰ期(增殖期)

此期精巢开始发育, 在靠近足部位置可观察到精巢组织外观呈线形。从精巢组织切片观察, 精巢内有少量生殖滤泡生成, 开始时范围较小, 呈不规则长条状, 层数仅有几层, 夹在结缔组织之间。滤泡壁很薄、滤泡中多为空, 此时滤泡内以精原细胞为主, 附在滤泡壁上, 分布在精巢各处。此阶段精巢细胞染色程度较浅(图1a)。

2.1.2 Ⅱ期(生长期)

此期精巢外观呈现淡白色。精巢组织切片中滤泡开始呈线形, 随着精巢中滤泡的发育, 滤泡逐渐发育成长条形, 体积变大, 分布在精巢组织多处。生长后期滤泡发育成圆形或椭圆形, 各滤泡形状和大小较均匀, 连成为团状并向四周蔓延的趋势。结缔组织逐渐变少, 此时精巢细胞染色程度比增殖期深。同时滤泡内生精小管纵横, 精子附在生精小管上逐渐发育, 向滤泡腔内推进, 精子在滤泡内开始呈现流水状分布(图1b)。

2.1.3 Ⅲ期(成熟期)

此期精巢外观呈现饱满状、颜色为乳白色。精巢覆盖在整个内脏团上, 可见精巢内生精小管呈叶脉状散布。轻轻挤压精巢, 会有少量精子流出。取少许精子放入海水中, 在光学显微镜下可观察到精子活力很强, 呈流沙状涌动。从精巢组织切片中观察, 精巢内滤泡面积达到最大, 占据精巢大部分面积。同时滤泡内精细胞成簇、密集辐射状排列, 附着在生精小管上, 由中心向四周发散, 呈流水状。到后期大部分精细胞发育为成熟精子, 成熟精子进入滤泡腔中(图1c)。

2.1.4 Ⅳ期(排放期)

精巢在排放期饱满度开始下降、贝体消瘦。此时轻按精巢, 会有精子从精巢大量涌出。随着精子开始大量排放, 可观察到裸露出来的生精小管, 滤泡内精子数量大幅度减少。排放期后期, 滤泡内精子排放完毕形成空腔, 呈不规则形状。滤泡内有少量残留的精细胞, 未排出的精细胞开始被滤泡吸收(图1d)。

2.1.5 Ⅴ期(休止期)

在休止期前期, 结缔组织快速生长, 精巢中多数滤泡开始变为空腔, 往后滤泡空腔逐渐消失, 精巢开始退化, 结束一轮生殖周期。同时, 织锦巴非蛤的精巢退化, 颜色与正常组织基本一致, 此时从解剖观察、精巢组织切片观察中难以分辨雌雄(图1e)。

2.2 广西北部湾织锦巴非蛤精巢周年发育分布规律

织锦巴非蛤精巢1周年内有1个发育周期。广西北部湾防城港海域织锦巴非蛤精巢发育各期的周年分布和肥满度变化见表2, 精巢周年发育分期见图2。广西北部湾防城港海域水温在2月开始缓慢升高, 6月海区水温达到最高为30.5℃, 织锦巴非蛤进入增殖期(5月—7月)和生长期(7月—9月), 织锦巴非蛤精巢随着水温的升高而快速发育, 肥满度开始缓慢上升, 为精巢发育进行物质能量储存。9月织锦巴非蛤进入成熟期, 此时织锦巴非蛤的肥满度达到最高, 为37.40%。9月—翌年1月为织锦巴非蛤精巢成熟期(9月—11月)和排放期(11月—翌年1月), 织锦巴非蛤精巢中精子开始排放, 肥满度也随之下降。到翌年1月底织锦巴非蛤的精子基本排放完毕, 进入休止期(翌年1月—4月), 完成一轮生殖周期。
表 2 广西北部湾织锦巴非蛤精巢发育周年分布规律

Tab. 2 Annual distribution of spermary development stages of P. textile in the Beibu Gulf, Guangxi

取样日期 肥满度 精巢发育分期 总数/个 盐度/‰ 水温/℃
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
2020-11-29 25.20 8 5 1 14 27.4 22.0
2020-12-21 21.09 7 2 9 27.5 17.2
2021-01-08 18.33 1 5 2 8 29.4 15.6
2021-02-24 16.64 2 8 10 30.9 17.3
2021-03-18 20.26 11 11 30.0 21.0
2021-04-22 21.24 8 8 30.0 27.5
2021-05-20 27.90 7 2 4 13 28.0 29.5
2021-06-23 28.24 3 7 1 10 28.4 30.5
2021-07-15 34.89 1 4 2 7 29.0 29.7
2021-08-18 34.83 2 6 2 10 30.0 29.8
2021-09-17 37.40 2 6 8 31.0 29.8
2021-10-20 33.92 4 2 6 29.0 25.5

注: Ⅰ~Ⅴ表格内数字为个体数

图2 织锦巴非蛤周年精巢发育分期分布

Fig. 2 Staged distribution of the annual spermary development in P. textile

2.3 织锦巴非蛤的精子发生

根据精细胞在滤泡中的位置, 大小和形状等发育情况, 将织锦巴非蛤的精子发生分为精原细胞期、生长初级精母细胞、生长次级精母细胞、精细胞、成熟精子5个时期, 各个时期发育特点见表3, 各期的精子形态见图3。
表3 织锦巴非蛤精细胞各时期发育特点

Tab. 3 Development characteristics of the spermatid of P. textile at various stages

发育分期 出现时期及位置 细胞特点
精原细胞 精巢发育各个阶段均可观察到精原细胞, 增殖期较多。由滤泡壁上的上皮细胞增殖而来, 分布在滤泡基膜和生精小管附近。可分为 A型和B型精原细胞。A型细胞一般贴附在滤泡壁或者基膜上, B型分布在滤泡各个部位或紧贴A型精原细胞。 精原细胞形状为圆形或椭圆形, 体积在精子发育过程中最大。A型精原细胞胞内物质少、核仁显现, 但不位于细胞中央, 直径在5.04~6.43μm。B型胞内物质趋于紧密、核仁不明显, 直径在4.89~6.98μm。此期精原细胞染色较浅。
生长初级精母细胞 在精巢发育的生长期较多, 成熟期也存在。生长初级精母细胞由精原细胞A型分化而来, 主要分布在生精小管附近, 靠近滤泡壁。 形状为椭圆形或者圆形, 直径在3.56~4.78μm, 比精原细胞小, 细胞核不位于细胞的中央。
生长次级精母细胞 生长期和成熟期数量最多, 分布不规律, 在生精小管附近。 形状为椭圆形或者圆形, 细胞直径比初级精母细胞小, 直径在2.12~3.87μm, 此期细胞的核膜、核仁不清晰, 细胞核染色质开始浓缩。
精细胞 成熟期、排放期可观察到较多的精细胞, 分布在滤泡中生精小管周围。 精细胞分为前期、中期、后期3个时期。前期主要为椭圆形或者圆形, 至中期大部分转变为椭圆形, 后期为成熟精子。此期染色质高度浓缩, 染色程度高。
成熟精子 在成熟期和排放期成熟精子数量最多, 分布在生精小管上, 以头部朝向滤泡壁、尾部聚集成束朝向滤泡腔中心。 精细胞经过复杂变化形成具有特殊结构的精子。成熟精子呈子弹头形状, 头部粗、尾部细。染色质高度浓缩, 染色程度深。在滤泡中呈菊花状散布, 聚集成束。
图3 织锦巴非蛤各个时期的雄性生殖细胞

a. 精原细胞期, 示A型精原细胞(Spe-A)、B型精原细胞(Spe-B); b. 初级精母细胞期, 示初级精母细胞(Ps)、次级精母细胞(Ss); c. 次级精母细胞期, 示初级精母细胞(Ps)、次级精母细胞(Ss); d. 精细胞期和精子期, 示生精小管(St)、精细胞前期(Sip)、精细胞中期(Sim)、成熟精子(Ms)

Fig. 3 The different stages of male reproductive cell of P. textile.

(a) Spermatogonium phase, Spe-A: spermatogonia A, Spe-B: spermatogonia B; (b) Primary spermatocyte, Ps: Primary spermatocyte, Ss: Secondary spermatocyte; (c) Secondary spermatocyte phase, Ps: Primary spermatocyte, Ss: Secondary spermatocyte; (d) Sperm cells period and sperm phase, St: Seminiferous tubule, Sip: Spermatid in prophase, Sim; Spermatid in metaphase, Ms: Mature Sperm

2.4 织锦巴非蛤的精子形态和超微结构

织锦巴非蛤成熟精子为典型的鞭毛型精子, 由头部、中部和尾部构成。头部为顶体和精核, 中部为线粒体和中心粒复合体, 尾部为远端中心粒向后延伸形成的鞭毛。织锦巴非蛤成熟精子全长约为46.04μm, 成熟精子的形态及超微结构如图4所示。
图4 织锦巴非蛤精子的超微结构观察

a. 精子, 示头部(H); b. 精子头部和中部, 示顶体(A)、精核(N)、线粒体(M)、鞭毛 (F); c. 精子中部横切, 示远端中心粒(DC)、线粒体(M); d. 精子纵切, 示质膜(PM)、核前窝(FP)、植入窝(IF); e. 精子头部与中部纵切, 示亚顶体腔(SS)、核后窝(PP)、核膜(MN); f. 精子中部纵切, 示近端中心粒(PC)、精核(N)、线粒体(M); g. 尾部鞭毛纵切, 示鞭毛(F)、轴丝(AX); h. 尾部鞭毛纵切, 示中心微管(CM)、双联体微管(DM)、质膜(PM); i. 精子尾部鞭毛横切, 示鞭毛(F); j. 尾部鞭毛横切, 示中心微管(CM)、双联体微管(DM)

Fig. 4 Ultrastructural observations on the sperm of P. textile.

(a) Sperm, showing head (H); (b) Sperm head and mid-section, showing acrosome (A), nucleus (N), mitochondria (M), flagellum (F); (c) Cross section of mid-section, showing distal centrioles (DC) and mitochondria (M); (d) Sperm longitudinal section, showing plasma membrane (PM), front nuclear pocket (FP), implantation fossa (IF); (e) Longitudinal section of mid-section, showing subacrosomal space (SS), posterior pit (PP), nuclear membranes (NM); (f) Mid-sperm cross section, showing proximal centrioles (PC), nucleus (N); (g) Longitudinal section of tail flagella, showing flagellum (F), axoneme (AX); (h) Longitudinal section of tail flagella, showing central microtubule (CM), doublet microtubules (DM), plasm membrane (PM); (i) Cross section of tail flagella, showing flagellum (F); (j) Cross section of tail flagella, showing microtubule (CM), doublet microtubules (DM)

2.4.1 精子头部

织锦巴非蛤精子头部呈子弹型, 由精核和顶体构成(图4b)。精子头部仍可观察到有质膜包裹(图4d)。精核前端细、后端粗呈长圆柱形, 前端直径约为0.71μm, 后端直径约为1.34μm, 长度为1.97μm, 精核长宽比值为1.47。精核电子密度大, 染色质在精核内均匀分布, 其中有少量电子密度低、形状不规则的泡状结构区域, 为核泡等物质形成的囊泡状结构(图4d, 4e)。织锦巴非蛤成熟精子顶体为圆锥形, 底部直径约为0.59μm, 高度约为0.51μm。在顶体和精核的连接处有一处“U”形窝, 为核前窝(图4d), 在核前窝中央往顶体前有一个腔, 为亚顶体腔(图4e)呈现倒“V”形, 可观察到腔内有低密度电子颗粒物。

2.4.2 中部

中部位于头部和尾部鞭毛之间, 精子的中部由中心粒复合体和线粒体组成, 中心粒复合体由近端中心粒(图4f)和远端中心粒(图4c)相互垂直构成, 两者大小相当, 直径约0.25~0.29μm, 在精核和中心粒复合体之间有一间隙, 为核后窝(图4e)。近端中心粒与精核主轴垂直, 远端中心粒与精核主轴平行。近端中心粒与远端中心粒呈“T”形, 远端中心粒向后延伸连接着尾部的轴丝。4个圆形线粒体紧密围绕在中心粒复合体周围, 线粒体部分嵌入精核内与之结合, 形成一个植入窝(图4d), 线粒体直径约为1.07μm。线粒体为双层膜, 其中内膜向线粒体内部折叠成褶皱状嵴突, 线粒体内部电子密度均匀。线粒体和质膜之间有一定距离, 可明显观察到两者间隙中的颗粒状物质(图4f)。

2.4.3 尾部

由远端中心粒延伸的轴丝而来, 尾部鞭毛由轴丝和外包着的质膜组成(图4g, 4h), 质膜为双层膜, 形成波浪状褶皱。尾部较长, 约为38.8μm, 截面直径约为0.21μm, 精子尾部长度与直径比值约为184, 轴丝组成为典型的“9+2”结构, 由2条中心微管(CM)和外侧9条成对微管(DM)组成(图4i, 4j)。

3 讨论

3.1 织锦巴非蛤的精巢发育分期

正确划分贝类的精巢发育分期, 有利于了解和掌握贝类繁殖规律和繁殖季节, 从而指导人工苗种繁育。目前对于不同双壳贝类的精巢发育阶段有不同划分方法, 对于双壳贝类精巢发育分期划分都以组织切片观察为主, 辅以形态解剖观察(Qiu et al, 2014; 宁军号 等, 2015; 朱星海 等, 2019)。双壳贝类精巢发育分期主要分为4个时期, 如风信标扇贝(Patinopecten caurinus)(朱星海 等, 2019), 5个时期, 如偏顶蛤(Modiolus modiolus)(宁军号 等, 2015)、钝缀锦蛤 (连昌朋 等, 2022), 6个时期, 如薄片镜蛤(Dosinia corrugate)(鹿瑶 等, 2015)。本研究中, 织锦巴非蛤的精巢发育分期为增殖期、生长期、成熟期、排放期和休止期共5个时期, 与红树蚬(郭云鹏等, 2020)、波纹巴非蛤(赵志江 等, 1991)、钝缀锦蛤 (连昌朋 等, 2022)等双壳贝类精巢发育分期相似。
贝类的肥满度与营养物质吸收、存储和精卵细胞排放等有密切联系, 精巢发育程度、水温和饵料丰度等都是影响贝类肥满度变化的因子(张福绥 等, 1991)。本研究表明, 海区水温与织锦巴非蛤精巢发育和肥满度的变化具有一定规律性, 随海区水温逐渐升高, 织锦巴非蛤的精巢开始进入增殖期和生长期, 肥满度增加。冬季水温降低时, 织锦巴非蛤的精巢进入排放期, 精子大量排放, 肥满度降低。偏顶蛤(宁军号 等, 2015)、钝缀锦蛤(连昌朋 等, 2022)也存在此现象。同时, 海水盐度变化也影响双壳贝类存活和生长, 是影响贝类生长、繁殖的重要环境因子之一, 在不同发育阶段的盐度适应范围不同, 随着贝类的生长发育, 对低盐度的适应性更强(何义朝 等, 1999; 尤仲杰 等, 2003)。盐度过高或者过低会导致双壳贝类死亡, 主要是海水渗透压改变, 导致双壳贝类的渗透压调节能力失调(Velez et al, 2016)。本研究表明, 广西北部湾防城港海域周年盐度变化在27.4‰~31.0‰。粟志民等(2011)研究表明, 织锦巴非蛤为广盐性贝类, 稚贝生长适宜盐度为 24.7‰~33.8‰, 生存最适盐度为26.0‰~ 27.3‰, 在低盐和高盐环境中均表现出较强的耐受性, 但对低盐更敏感。

3.2 织锦巴非蛤成熟精子的超微结构

双壳贝类的精子形态是不同种属之间的重要分类和亲缘关系区分依据(Oyarzun et al, 2014)。Hodgson等(1988)通过对腹足纲16个物种精子超微结构进行比较, 结果表明不同物种成熟精子结构具有差异, 可作为物种进化和分类的依据。在双壳贝类中, 成熟精子结构是区分双壳贝类进化地位和物种区分的主要依据: 1) 精子头部的顶体(有无、形状、大小)、亚顶体腔(有无轴棒等特殊构造)、精核(大小、长度、电子密度); 2) 中部的线粒体(数量、大小)、中心粒(大小、垂直角度); 3) 尾部鞭毛(轴体的组成、质膜有无); 4) 有无核前窝与核后窝(Hodgson et al, 1988; 赵志江 等, 1992; 邓道贵 等, 2000; 郭延平 等, 2002; 余红卫, 2012; 周小龙 等, 2012; Oyarzun et al, 2014)。这些精子结构的差异均可以作为双壳贝类进化地位和物种区分依据。本文首次对织锦巴非蛤精子超微结构进行研究, 同时与近江蛏等部分双壳贝类的成熟精子全长、顶体类型、精核长宽比值等进行了比较(表4)。
表4 不同海产双壳贝类精子超微结构比较

Tab. 4 Ultrastructural comparison of the sperm of different marine bivalve shellfish

物种 精子长度/μm 顶体形状 精核长宽比值 线粒体数目 尾部结构 参考文献
织锦巴非蛤(Paphia textile)
近江蛏(Sinonovacula rivularis)		 46.04
57.00~58.00		 圆锥形
保龄球形		 1.47
0.36		 4
4		 “9+2”双联体微管结构
“9+2”双联体微管结构		 本文
黄瑞等(2011)
钝缀锦蛤(Tapes conspersus) 59.27 倒“V”形 1.27 5 “9+2”双联体微管结构 连昌朋等(2022)
靓巴非蛤(Paphia schnelliana)
施氏獭蛤(Lutraria sieboldii)		 50.16
73.21		 圆锥形
半球形		 1.42
1.14		 4
5		 —
—		 Chen等(2021)
Chen等(2021)
魁蚶(Scapharca broughtoni) — 圆锥形 0.89 5 “9+2”双联体微管结构 叶婧等(2012)
斧文蛤(Meretrix lamarkii) 45.20~47.70 圆锥形 1.41 5 “9+2”双联体微管结构 董迎辉等(2012)
波纹巴非蛤(Paphia undulata)
红树蚬(Polymesoda erosa)		 —
—		 圆锥形
倒“V”形		 1.43
4.00		 4
4		 “9+2”双联体微管结构
“9+2”双联体微管结构		 赵志江等(1992)
郭云鹏等(2020)
长牡蛎(Crassostrea gigas) 57.77 圆锥形 1.12 4 “9+2”双联体微管结构 Dong等(2005)
虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis) 50.00 倒“V”形 3.00 4~5 “9+2”双联体微管结构 韩厚伟等(2008)

注: —表示暂无数据

3.2.1 精子头部

不同双壳贝类精子顶体形态存在差异, 表明其受精方式不同, 顶体结构越复杂, 受精过程也随之困难(Campos et al, 2020)。周小龙等(2012)比较了25种双壳贝类精子形态, 结果表明精子头部等结构具有差异, 可作为双壳贝类近缘种类的鉴别依据之一。双壳贝类精子头部的顶体主要分为倒“V”形、锥形、倒漏斗形、尖辣椒形等类型(竺俊全 等, 2002)。帘蛤科钝缀锦蛤(连昌朋 等, 2022)等贝类成熟精子顶体为倒“V”形, 靓巴非蛤(Paphia schnelliana)(Chen et al, 2021)、斧文蛤(Meretrix lamarkii)(董迎辉 等, 2012)等贝类成熟精子顶体为圆锥形。本研究结果表明, 织锦巴非蛤精子的顶体形状为圆锥形, 与波纹巴非蛤(赵志江 等, 1992)、斧文蛤(董迎辉 等, 2012)等相似。斧文蛤精子顶体前端则有短柱状突起(董迎辉 等, 2012)。近江蛏与缢蛏的精子顶体较为特殊, 顶体与精核通过1根顶体柄相连(黄瑞 等, 2011)。褶纹冠蚌(Cristaria plicata)和三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)精子顶体退化, 形成1个顶体囊泡(邓道贵 等, 2000; 郭延平 等, 2002)。可见不同种属的贝类因受精方式不同, 精子顶体形状也有差异。双壳贝类的精核一般呈卵圆形或长圆形。织锦巴非蛤的精核为圆柱形, 与钝缀锦蛤(连昌朋 等, 2022)、近江蛏(黄瑞 等, 2011)等一致。彩虹明樱蛤(Moerella iridescens)精核较特殊, 精核形成过程中拉伸的同时还伴随着细胞核扭转, 使得精核呈现螺旋状(余红卫, 2012)。因此, 精子头部差异可以作为双壳贝类物种区别和受精方式差异的依据之一。

3.2.2 精子中部

织锦巴非蛤成熟精子中部由线粒体、相互垂直的近端中心粒和远端中心粒构成。双壳贝类精子线粒体是游动型精子的主要能量供给来源, 成熟精子线粒体进行融合和内部嵴层数增多, 为受精活动提供能量准备(邓道贵 等, 2000)。姜明等(2003)研究表明长牡蛎(Crassostrea gigas)精子在入卵时存在线粒体消耗, 最终只携带1个线粒体进入卵子内。在斧文蛤(董迎辉 等, 2012)、虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)与栉孔扇贝(Chlamys farreri)(周丽青 等, 2011)也存在精子携带线粒体入卵现象, 表明双壳贝类精子的线粒体在受精活动中起重要作用。在腹足纲部分种类, 如台湾东风螺(Pabylonia fornosae)、疣荔枝螺(Purpura clavigera)等还存在线粒体鞘结构(黄洪龙 等, 2021)。香鱼(Plecoglossus altivelis)等鱼类精子中部则存在袖套结构, 包裹着线粒体(郑学斌 等, 2018)。精子中部线粒体数量与排列方式反映了物种进化地位, 同时也是物种间关系和种属区分的重要结构之一。本试验表明, 织锦巴非蛤成熟精子线粒体有4个, 呈瓣状排列。这与红树蚬(郭云鹏 等, 2020)、长牡蛎(Dong et al, 2005)、靓巴非蛤(Chen et al, 2021)等贝类的线粒体数目、排列方式一致。有研究表明, 在同一物种中存在线粒体数目不一致的情况。周小龙等(2012)比较了25种双壳贝类的成熟精子结构, 结果表明线粒体多数为4~6个。近江蛏线粒体为5个, 偶见4个或6个(黄瑞 等, 2011)。二倍体长牡蛎有4个线粒体, 但在四倍体长牡蛎中有4、5或6个线粒体, 其中5个线粒体的精子占一半以上(Dong et al, 2005)。关于某些双壳贝类精子中线粒体数目不一致的问题, 邓道贵等(2000)研究表明双壳贝类精子中线粒体数目出现差异是由于精子自身对线粒体融合调控偏差造成。

3.2.3 精子尾部

精子尾部是由远端中心粒向后延伸轴丝发展而来, 鞭毛摆动是受精活动中精子进入卵子的动力来源, 双壳贝类成熟精子大部分属于鞭毛类型(竺俊全 等, 2002)。本研究表明, 织锦巴非蛤精子尾部鞭毛长约38.80μm, 外被质膜, 为典型“9+2”双联体微管结构。织锦巴非蛤成熟精子全长比帘蛤科的靓巴非蛤(50.16μm)(Chen et al, 2021)、钝缀锦蛤(59.27μm)(连昌朋 等, 2022)等贝类稍短。有些水产动物成熟精子的尾部具有特殊结构, 如香鱼等鱼类精子尾部鞭毛处还有侧鳍结构存在, 可增强鱼类精子的运动能力(郑学斌 等, 2018)。本研究表明, 织锦巴非蛤成熟精子尾部只有1条轴丝, 由质膜包裹。在有些物种精子尾部鞭毛中存在多个轴丝的情况。连昌朋等(2022)研究表明, 钝缀锦蛤精子尾部鞭毛质膜内存在2个“9+2”双联体微管结构, 这在虾夷扇贝精子中也存在此情况, 认为可能为海水污染而导致畸形精子(韩厚伟 等, 2008)。有关质膜内存在多个“9+2”双联体微管结构方面有待进一步研究。

4 结论

织锦巴非蛤精巢发育划分为增殖期、生长期、成熟期、排放期、休止期5个时期, 成熟期、排放期集中在每年9月—翌年1月。织锦巴非蛤成熟精子为典型的鞭毛型, 由头部、中部和尾部组成。精子头部由顶体和精核组成顶体, 中部由4个环绕成瓣状的线粒体与2个相互垂直的近、远端中心粒组成, 尾部组成是典型 “9+2”双联体微管结构。

参考文献

原文顺序 | 文献年度倒序 | 文中引用次数倒序
[1]
邓道贵, 谈奇坤, 2000. 褶纹冠蚌精子发生的研究[J]. 水生生物学报, 24(1): 63-66.

DENG DAOGUI, TAN QIKUN, 2000. Ultrastructural studies of spermatogenesis of the fresh-water mussel, Cristaris plicata (Bivalva unionidae)[J]. Acta Hydrobiologica Sinica, 24(1): 63-66 (in Chinses with English abstract).

[2]
邓正华, 翟子钦, 魏海军, 等, 2022. 织锦巴非蛤幼虫对不同种类单胞藻的摄食和消化效果[J]. 南方农业学报, 53(5): 1448-1556.

DENG ZHENGHUA, ZHAI ZIQIN, WEI HAIJUN, et al, 2022. Effects of Paphia textile larvae on ingestion and digestion of different microalgae species[J]. Journal of Southern Agriculture, 53(5): 1448-1556 (in Chinses with English abstract).

[3]
董迎辉, 林志华, 姚韩韩, 等, 2012. 斧文蛤精子超微结构与受精过程的细胞学变化[J]. 水产学报, 35(3): 356-364.

DONG YINGHUI, LIN ZHIHUA, YAO HANHAN, et al, 2012. Studies on ultrastructure of spermatoazoon and cytological change of nuclear behavior on fertilization in Meretrix lamarkii[J]. Journal of Fisheries of China, 35(3): 356-364 (in Chinses with English abstract).

[4]
郭延平, 谈奇坤, 陈士超, 2002. 三角帆蚌精子的形态及超微结构[J]. 动物学杂志, 37(2): 10-13.

GUO YANPING, TAN QIKUN, CHEN SHICHAO, 2002. The morphology and ultrastructure of the spermatozoa of fresh-water mussel, Hyriopsis cumingii[J]. Chinses Journal Zoology, 37(2): 10-13 (in Chinses with English abstract).

[5]
郭云鹏, 王公嗣, 黄勃, 2020. 红树蚬精巢发育的组织学研究和精子超微结构的观察[J]. 福建农林大学学报(自然科学版), 49(4): 519-523.

GUO YUNPENG, WANG GONGSI, HUANG BO, 2020. Histological study of spermary development and ultrastructural observation of sperm from Polymesoda erosa[J]. Journal of Fujian Agriculture and Forestry University (Natural Science Edition), 49(4): 519-523 (in Chinses with English abstract).

[6]
韩厚伟, 高悦勉, 刘春凤, 等, 2008. 虾夷扇贝精子的超微结构[J]. 动物学杂志, 43(1): 75-81.

HAN HOUWEI, GAO YUEMIAN, LIU CHUNFENG, et al, 2008. Ultrastructure of the spermatozoon in Patinopecten yessoensis[J]. Chinses Journal Zoology, 43(1): 75-81 (in Chinses with English abstract).

[7]
何义朝, 张福绥, 王萍, 等, 1999. 墨西哥湾扇贝稚贝对盐度的耐受力[J]. 海洋学报, 21(4): 87-91.

HE YICHAO, ZHANG FUSUI, WANG PING, et al, 1999. Salinity tolerance of the southern bay scallop Argopeten irradians concentricus[J]. Acta Oceanologica Sinica, 21(4): 87-91 (in Chinses with English abstract).

[8]
黄洪龙, 骆轩, 柯才焕, 2021. 腹足类精子超微结构研究进展[J]. 渔业研究, 43(1): 103-110.

DOI

HUANG HONGLONG, LOU XUAN, KE CAIHUAN, 2021. Advances in the ultrastructure of sperm in Gastropoda[J]. Journal of Fisheries Research, 43(1): 103-110 (in Chinses with English abstract).

[9]
黄瑞, 黄标武, 李林春, 等, 2011. 近江蛏精子超微形态结构观察及与缢蛏精子的比较[J]. 水产学报, 35(1): 58-65.

HUANG RUI, HUANG BIAOWU, LI LINCHUN, et al, 2011. Comparative ultrastructure of spermatozoa of Sinonovacula rivularis sp. nov. and Sinonovacula constriicta[J]. Journal of Fisheries of China, 35(1): 58-65 (in Chinses with English abstract).

[10]
姜明, 汝少国, 陶迺蓉, 等, 2003. 入卵过程中太平洋牡蛎精子超微结构的变化[J]. 青岛海洋大学学报, 33(4): 551-556.

JIANG MING, RU SHAOGUO, TAO NEIRONG, et al, 2003. Ultrastructure change of the sperm of Crassostrea gigas during egg penetrating[J]. Journal of Ocean University of Qingdao, 33(4): 551-556 (in Chinses with English abstract).

[11]
赖胜琪, 尹聪, 邱炬维, 等, 2022. 北部湾沿海织锦巴非蛤不同地理群体形态差异研究[J]. 广东农业科学, 49(7): 105-112.

LAI SHENGQI, YIN CONG, QIU JUWEI, et al, 2022. Morphological variation analysis of different Paphia textile geographical populations along the coast of Beibu Gulf[J]. Guangdong Agricultural Sciences, 49(7): 105-112 (in Chinses with English abstract).

[12]
栗志民, 刘志刚, 韩伟贤, 等, 2011. 织锦巴非蛤稚贝盐度适应性研究[J]. 海洋科学, 35(10): 96-102.

LI ZHIMIN, LIU ZHIGANG, HAN WEIXIAN, et al, 2011. Salinity adaptability of Paphia textile spats at different salinity levels[J]. Marine Sciences, 35(10): 96-102 (in Chinses with English abstract).

[13]
连昌朋, 王超奇, 杨凌, 等, 2022. 广西北部湾钝缀锦蛤精巢发育、精子发生及超微结构研究[J]. 海洋科学, 46(6): 80-89.

LIAN CHANGPENG, WANG CHAOQI, YANG LING, et al, 2022. Testis and germ cell development and sperm ultrastructure of Tapes conspersus inhabiting the Beibu Gulf, Guangxi, China[J]. Marine Sciences, 46(6): 80-89 (in Chinses with English abstract).

[14]
刘海娟, 陈瑞芳, 曾梦清, 等, 2022. 织锦巴非蛤人工养殖技术研究[J]. 科学养鱼, 38(11): 61-62.

LIU HAIJUAN, CHEN RUIFANG, ZENG MENGQING, et al, 2022. Study on the artificial culture technology of Paphia textile[J]. Scientific Fish Farming, 38(11): 61-62 (in Chinses with English abstract).

[15]
鹿瑶, 刘辉, 聂鸿涛, 等, 2015. 辽宁沿海薄片镜蛤的繁殖周期研究[J]. 大连海洋大学学报, 30(6): 647-652.

LU YAO, LIU HUI, NIE HONGTAO, et al, 2015. Reproductive cycle of clam Dosinia corrugata along coast of Liaoning province[J]. Journal of Dalian Ocean University, 30(6): 647-652 (in Chinses with English abstract).

[16]
宁军号, 常亚青, 宋坚, 等, 2015. 偏顶蛤的性腺发育和生殖周期[J]. 中国水产科学, 22(3): 469-477.

NING JUNHAO, CHANG YAQING, SONG JIAN, et al, 2015. Gonadal development and the reproductive cycle of Modiolus modiolus[J]. Journal of Fishery Sciences of China, 22(3): 469-477 (in Chinses with English abstract).

[17]
吴加莹, 戴明姝, 刘志刚, 等, 2023. 温度对织锦巴非蛤稚贝生存和生长的影响[J]. 南方水产科学, 19(2): 1-8.

WU JIAYING, DAI MINGSHU, LIU ZHIGANG, et al, 2023. Effects of temperature on survival and growth of Paphia textile juveniles[J]. South China Fisheries Science, 19(2): 1-8 (in Chinses with English abstract).

[18]
徐炳杰, 刘一鸣, 连昌朋, 等, 2024. 广西北部湾海域织锦巴非蛤卵巢发育、卵子及卵黄发生的研究[J]. 热带海洋学报, https://kns.cnki.net/kcms2/detail/44.1500.P.20230726.0854.002.html.

XU BINGJIE, LIU YIMING, LIAN CHANGPENG, et al, 2024. Ovarian development, oocyte and yolk production of the Paphia textile in Beibu Gulf, Guangxi[J]. Journal of Tropical Oceanography, https://kns.cnki.net/kcms2/detail/44.1500.P.20230726.0854.002.html (in Chinses with English abstract).

[19]
徐凤山, 张素萍, 2008. 中国海产双壳类图志[M]. 北京: 科学出版社:244- 245.

XU FENGSHAN, ZHANG SUPING, 2008. An illustrated bivalvia mollusca fauna of China[M]. Beijing: Science press: 244-245 (in Chinese with English abstract).

[20]
叶婧, 姜建湖, 2012. 魁蚶精子发生的超微结构[J]. 上海海洋大学学报, 21(2): 199-203.

YE JING, JIANG JIANHU, 2012. Ultrastructure of spermatogenesis of Scapharca broughtoni[J]. Journal of Shanghai Ocean University, 21(2): 199-203 (in Chinses with English abstract).

[21]
尤仲杰, 陆彤霞, 马斌, 等, 2003. 几种环境因子对墨西哥湾扇贝幼虫和稚贝生长与存活的影响[J]. 热带海洋学报, 22(3): 22-29.

YOU ZHONGJIE, LU TONGXIA, MA BIN, et al, 2003. Influences of some environmental factors on growth and survival of Argopecten irradians concentricus larvae and juveniles[J]. Journal of Tropical Oceanography, 22(3): 22-29 (in Chinses with English abstract).

[22]
余红卫, 2012. 彩虹明樱蛤精子发生的超微结构[J]. 电子显微学报, 31(1): 65-69.

YU HONGWEI, 2012. Ultrastructure of the spermatogenesis of Moerella iridescens Benson[J]. Journal of Chinese Electron Microscopy Society, 31(1): 65-69 (in Chinses with English abstract).

[23]
翟子钦, 喻达辉, 白丽蓉, 2022. 织锦巴非蛤形态性状对体质量的影响[J]. 广东农业科学, 49(7): 113-119.

ZHAI ZIQIN, YU DAHUI, BAI LIRONG, 2022. Effects of Morphological traits on body mass of Paphia textile[J]. Guangdong Agricultural Sciences, 49(7): 113-119 (in Chinses with English abstract).

[24]
张福绥, 马江虎, 何义朝, 等, 1991. 胶州湾海湾扇贝肥满度的研究[J]. 海洋与湖沼, 22(2): 97-103.

ZHANG FUSUI, MA JIANGHU, HE YICHAO, et al, 1991. A study on the meat condition of the Bay scallop in JiaoZhou Bay[J]. Oceanologia et Limnologia Sinica, 22(2): 97-103 (in Chinses with English abstract).

[25]
赵志江, 李复雪, 柯才焕, 1991. 波纹巴非蛤的性腺发育和生殖周期[J]. 水产学报, 15(1): 1-8.

ZHAO ZHIJIANG, LI FUXUE, KE CAIHUAN, 1991. On the sex gonad development and reproductive cycle of clam Paphia undulata[J]. Journal of Fisheries of China, 15(1): 1-8 (in Chinses with English abstract).

[26]
赵志江, 李复雪, 1992. 波纹巴非蛤Paphia undulata精子发生的超微结构[J]. 台湾海峡, 11(3): 238-243.

ZHAO HIJIANG, LI FUXUE, 1992. Ultrastructural studies of spermatogenesis in Paphia undulata[J]. Journal of Oceanography in Taiwan Strait, 11(3): 238-243 (in Chinses with English abstract).

[27]
郑学斌, 张清科, 乐韵, 等, 2018. 香鱼(Plecoglossus altivelis)精子的超微结构及其与鲤形目及鲑形目其他鱼类精子结构的比较研究[J]. 海洋与湖沼, 49(4): 866-872.

ZHENG XUEBIN, ZHANG QINGKE, YUE YUN, et al, 2018. Scanning and transmission electron microscopic observation of spermatozoon in Plecoglossus altivelis[J]. Oceanologiaet Limnologia Sinica, 49(4): 866-872 (in Chinses with English abstract).

[28]
周丽青, 杨爱国, 刘志鸿, 等, 2011. 扇贝精子及卵子的受精生物学特性[J]. 渔业科学进展, 32(1): 75-81.

ZHOU LIQING, YANG AIGUO, LIU ZHIHONG, et al, 2011. Fertilization biology of eggs and sperms in two scallop species, Patinopecten yessoensis and Chlamys farreri[J]. Progress in Fishery Sciences, 32(1): 75-81 (in Chinses with English abstract).

[29]
周小龙, 董迎辉, 边平江, 等, 2012. 帘文蛤精子超微结构及与其他双壳贝类的比较[J]. 台湾海峡, 31(4): 495-500.

ZHOU XIAOLONG, DONG YINGHUI, BIAN PINGJIANG, et al, 2012. Ultrastructure of spermatozoon in Meretrix lyrata and comparision with other bivalves[J]. Journal of Oceanography in Taiwan Strait, 31(4): 495-500 (in Chinses with English abstract).

[30]
竺俊全, 杨万喜, 2002. 双壳类软体动物精子发生及其在系统演化研究中的应用前景[J]. 海洋湖沼通报, 4(5): 25-31.

ZHU JUNQUAN, YANG WANGXI, 2002. Spermatogenesis of Bivalvia and its prospective application in the study of phylogenetic development[J]. Transactions of Oceanology and Limnology, 4(5): 25-31 (in Chinses with English abstract).

[31]
朱星海, 孙红振, 杨祖晶, 等, 2019. 风信标扇贝的性腺发育与繁殖周期规律研究[J]. 中国海洋大学学报(自然科学版), 49(2): 52-58.

ZHU XINGHAI, SUN HONGZHEN, YANG ZHUJING, et al, 2019. Studies on gonadal development and the reproductive cycle of Patinopecten caurinus[J]. Periodical of Ocean University of China, 49(2): 52-58 (in Chinses with English abstract).

[32]
庄启谦, 2001. 中国动物志软体动物门双壳纲帘蛤科[M]. 北京:科学出版社:53- 54.

ZHUANG QIQIAN, 2001. Fauna sinica, bivalvia, veneridae[M]. Beijing: Science press: 53-54 (in Chinese with English abstract).

[33]
邹杰, 彭慧婧, 杨家林, 2019. 织锦巴非蛤人工种苗培育及浅海养殖试验[J]. 科学养鱼, 35(10): 57-58.

ZOU JIE, PENG HUIJING, YANG JIALIN, 2019. Experiment on artificial propagation and culture in shallow sea of Paphia textile[J]. Scientific Fish Farming, 35(10): 57-58 (in Chinses with English abstract).

[34]
CAMPOS A, INTROĺNI G O, TALLARICO L F, et al, 2020. Ultrastructure of the spermatozoa of three species of anomalodesmata (Mollusca, Bivalvia) and phylogenetic implications[J]. Acta Zoologica, 101(2): 156-166.

DOI

[35]
CHEN JIAN, DENG ZHENGHUA, WEI HAIJUN, et al, 2021. Spermatozoa morphology and embryo development of four species of bivalves from Beibu Gulf[J]. Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences, 21(2): 51-61.

DOI

[36]
CHEN XIAOMING, LI JIAKAI, XIAO SHIJUN, et al, 2016. De novo assembly and characterization of foot transcriptome and microsatellite marker development for Paphia textile[J]. Gene, 576: 537-543.

DOI

[37]
DONG QIANXIANG, HUANG CHANGJIANG, TIERSCH T R, 2005. Spermatozoal ultrastructure of diploid and tetraploid Pacific oysters[J]. Aquaculture, 249(1-4): 487-496.

DOI

[38]
HODGSON A N, BERNARD R T F, 1988. A comparison of the structure of the spermatozoa and spermatogenesis of 16 Species of Patellid limpet (Mollusca: Gastropoda: Archaeogastropoda)[J]. Journal of Morphology, 195(2): 205-223.

DOI

[39]
QIU TIANLONG, ZHANG TAO, BAI YUCEN, et al, 2014. Gonad development of the Pen Shell Atrina pectinata from Shandong Province, China[J]. Journal of Shellfish Research, 33(2): 465-471.

DOI

[40]
GALTSOFF P S, PHILPOTT D E, 1960. Ultrastructure of the spermatozoon of the oyster, Crassostrea virginica[J]. Journal of Ultrastructure Research, 3(3): 241-253.

DOI

[41]
OYARZUN P A, TORO J E, GARRIDO O, et al, 2014. Differences in sperm ultrastructure between Mytilus chilensis and Mytilus galloprovincialis (Bivalvia, Mytilidae): could be used as a taxonomic trait?[J]. Latin American Journal of Aquatic Research, 42(1): 172-179.

DOI

[42]
VELEZ C, FIGUEIRA E, SOARES A, et al, 2016. Combined effects of seawater acidification and salinity changes in Ruditapes philippinarum[J]. Aquatic Toxicology, 16(4): 141-150.

DOI

Options
文章导航

/

〈 〉