黄鳍棘鲷亲子鉴定技术建立及其在增殖放流效果评估上的应用
卢友军(1999—), 男, 重庆市巫溪县人, 硕士研究生, 主要从事水产动物遗传育种研究。email: 2748989402@qq.com |
Copy editor: 林强
收稿日期: 2024-09-11
修回日期: 2024-10-22
网络出版日期: 2024-10-28
基金资助
福建省科技计划项目(2023N0011)
福建省水产研究所项目(S23311)
福建省海洋渔业资源与生态环境重点实验室开放课题
Establishment of parentage assignment techniques in Acanthopagrus latus and its applications in stock enhancement assessment
Copy editor: LIN Qiang
Received date: 2024-09-11
Revised date: 2024-10-22
Online published: 2024-10-28
Supported by
Science and Technology Planning Project of Fujian Province, China(2023N0011)
Project of Fujian Institute of Fisheries(S23311)
Open Project of the Fujian Province Key Laboratory of Marine Fisheries Resources and Ecological Environment
为了对黄鳍棘鲷增殖放流效果进行评估, 本研究应用课题组构建的基因组开发了多态性高的微卫星分子标记, 建立了黄鳍棘鲷的亲子鉴定技术, 在此基础上, 对2023—2024年厦门湾黄鳍棘鲷增殖放流效果进行了评估, 具体研究结果如下: (1)多态性微卫星引物筛选: 在黄鳍棘鲷基因组上随机挑选110个微卫星位点设计引物, 以野生黄鳍棘鲷群体为材料初步筛选出9个多态性较高的位点; (2)亲子鉴定技术的建立: 以系谱关系已知的黄鳍棘鲷家系及其亲本(亲鱼20尾, 子代72尾)为材料, 利用上述筛选到的9个微卫星位点进行亲子鉴定分析, 结果显示9个微卫星位点共检测出145个等位基因, 平均等位基因数(Na)为16.11, 平均观测度杂合度(Ho)为0.788, 平均期望杂合度(He)为0.810, 平均多态性信息含量(polymorphic information content, PIC)为0.785, 具有丰富的多态性; 运用Cervus 3.0.7软件对该群体进行分析, 结果显示在置信度为95%条件下, 双亲性别已知模型的亲子鉴定成功率为98.61%, 双亲性别未知模型的亲子鉴定成功率为97.22%; (3)增殖放流效果评估: 对114尾放流亲本和264尾回捕个体利用上述建立的亲子鉴定技术进行分析, 在回捕的264尾黄鳍棘鲷中, 有8尾被确定为放流亲本的子代, 即对野生黄鳍棘鲷群体的资源贡献率为3.03%。研究结果可为今后黄鳍棘鲷种质资源鉴定, 增殖放流效果评估提供可靠的技术手段。
卢友军 , 陈强 , 黄良敏 , 游淞元 , 刘丁禹 , 马超 , 吴水清 , 刘贤德 . 黄鳍棘鲷亲子鉴定技术建立及其在增殖放流效果评估上的应用[J]. 热带海洋学报, 2025 , 44(3) : 141 -147 . DOI: 10.11978/2024175
To evaluate the stock enhancement effectiveness of Acanthopagrus latus, this study employed highly polymorphic microsatellite markers developed by our research group using the species' genome and established a parentage assignment technology. Based on this, we assessed the stock enhancement effectiveness of A. latus in Xiamen Bay sampled in 2023-2024. The specific findings are as follows: (1) Polymorphic primer screening: from 110 randomly selected microsatellite loci in the A. latus genome, we designed primers and preliminarily screened 9 loci with high polymorphism using a wild A. latus population. (2) Establishment of parentage assignment technology: using known pedigree families of A. latus, including 20 parental fish and 72 offspring, we performed parentage analysis with the 9 selected microsatellite loci. As shown by the results, a total of 145 alleles were detected across the loci, with an average allele number (Na) of 16.11, an average observed heterozygosity (Ho) of 0.788, an average expected heterozygosity (He) of 0.810, and an average polymorphic information content (PIC) of 0.785, indicating high polymorphism. The analysis using the Cervus 3.0.7 software showed that under a 95% confidence level, the parentage assignment success rate was 98.61% when the sex of both parents was known, and 97.22% when the sex was unknown. (3) Stock enhancement evaluation: the parentage assignment technology was applied to 114 released parental fish and 264 recaptured individuals. Among the 264 recaptured A. latus, 8 were identified as offspring of the released parents, indicating a resource contribution rate of 3.03% to the wild A. latus population. The results provide reliable technical methods for future genetic resource identification and stock enhancement evaluation of A. latus.
表1 黄鳍棘鲷9个微卫星位点的基本信息Tab. 1 Basic information of 9 microsatellite loci in A. latus |
位点 | 重复单元 | 荧光标记 | 引物序列 | 片段大小 | 退火温度/℃ |
---|---|---|---|---|---|
AL1 | (GT)10 | FAM | F: TGTGTCTGTGTGCTCGTGT R: TGGAGCAACAGAAAACACGC | 141 | 57℃ |
AL2 | (GTG)7 | FAM | F: GATCTGGAAATCTGCGGCGA R: TGGCCCGATCACCACTACTA | 162 | 58℃ |
AL3 | (CACG)5 | FAM | F: CTGAATTACACACGTGCACACA R: AGTGGAAGATGAGCACCGTC | 140 | 57.5℃ |
AL4 | (GGAC)5 | HEX | F: GAGGTGATGTGGATGGAGGG R: GCCCCCCCTCTTCTTTCAAA | 142 | 58℃ |
AL5 | (TAG)7 | FAM | F: AAATGTTGGCGTGGTTCACC R: GCAACAGGACACGAAGAAGC | 150 | 57℃ |
AL6 | (TGC)7 | HEX | F: GGTGGGTGGTTAAGTTCAATCC R: AGAATCTTCCAGCCCATTAAGC | 195 | 56℃ |
AL7 | (AGG)3 | FAM | F: GATACTGTCGCAGGCTGAGG R: AACCACACACACACAAAGCC | 200 | 58℃ |
AL8 | (ATC)3 | HEX | F: AGGTAGTACGCAGCACAACC R: CCTTCCAGAGAGTCTCTTTGAC | 188 | 57.5℃ |
AL9 | (AGAT)4 | HEX | F: TACAGTTCTGTGTCGGCTGC R: GATGCTTGAATTTCCTCCGGG | 186 | 58℃ |
表2 9个微卫星位点在黄鳍棘鲷亲本与子代中的遗传信息Tab. 2 Genetic information of 9 microsatellite loci in A. latus parents and offspring |
位点 | Na | Ho | He | PIC | HWE | FN |
---|---|---|---|---|---|---|
AL1 | 18 | 0.787 | 0.821 | 0.796 | NS | 0.0204 |
AL2 | 9 | 0.522 | 0.747 | 0.700 | ** | 0.1716 |
AL3 | 15 | 0.815 | 0.854 | 0.834 | NS | 0.0228 |
AL4 | 21 | 0.978 | 0.906 | 0.893 | ND | -0.0427 |
AL5 | 17 | 0.978 | 0.852 | 0.832 | * | -0.0779 |
AL6 | 11 | 0.457 | 0.589 | 0.557 | NS | 0.1333 |
AL7 | 23 | 0.780 | 0.829 | 0.808 | * | 0.0068 |
AL8 | 10 | 0.784 | 0.764 | 0.725 | NS | -0.0197 |
AL9 | 21 | 0.989 | 0.932 | 0.922 | ND | -0.0331 |
平均值 | 16.11 | 0.788 | 0.8103 | 0.785 | - | - |
注: NS表示不显著偏离(P>0.05); ND表示无结果; *表示偏离(P<0.05); **表示显著偏离(P<0.01); ***表示极显著偏离(P<0.001)。 |
表3 7个微卫星位点在回捕个体中的遗传信息Tab. 3 Genetic information of 7 microsatellite loci in recaptured individuals |
位点 | Na | Ho | He | PIC | HWE |
---|---|---|---|---|---|
AL1 | 29 | 0.883 | 0.904 | 0.895 | NS |
AL2 | 11 | 0.727 | 0.728 | 0.682 | NS |
AL3 | 24 | 0.818 | 0.912 | 0.904 | ** |
AL4 | 39 | 0.864 | 0.918 | 0.911 | * |
AL5 | 24 | 0.896 | 0.882 | 0.870 | *** |
AL6 | 40 | 0.463 | 0.797 | 0.786 | *** |
AL7 | 43 | 0.939 | 0.947 | 0.943 | ND |
平均值 | 30 | 0.798 | 0.8698 | 0.8559 |
注: NS表示不显著偏离(P>0.05); ND表示无结果; *表示偏离 (P<0.05); **表示显著偏离 (P<0.01); ***表示极显著偏离(P<0.001)。 |
表4 成功鉴定出亲本的回捕个体信息Tab. 4 Information of recaptured individuals with successfully assigned parents |
子代编号 | 匹配座位数 | 体长/mm | 体重/g | 体高/mm | 似然率值 | 候选亲本编号 |
---|---|---|---|---|---|---|
HB15 | 7 | 140 | 59.6 | 52 | 8.31 | A33/A42 |
HB33 | 6 | 150 | 89.29 | 56 | 8.58 | A51/A102 |
HB49 | 6 | 148 | 76.87 | 59 | 8.41 | A56/A64 |
HB51 | 7 | 148 | 62.31 | 50 | 7.69 | A11/A28 |
HB66 | 7 | 155 | 106.35 | 64 | 8.41 | A71/A86 |
HB74 | 6 | 145 | 108.37 | 65 | 7.71 | A43/A46 |
HB135 | 6 | 132 | 75.74 | 57 | 8.44 | A1/A48 |
HB167 | 6 | 177 | 181.74 | 79 | 10.7 | A7/A38 |
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