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长棘海星（Acanthaster planci）幼体特异性PCR检测技术与应用
张颖1，杨栎潼2，刘冰1, 3，郑凡昱1，罗鹏1，陈偿1, 4
1. 中国科学院南海海洋研究所，中国科学院热带海洋生物资源与重点实验室/广东省应用海洋生物学重点实验室，广东 广州 510301；
2. 厦门大学马来西亚分校，中国东盟海洋技术学院，雪兰莪，雪邦 43900；
3. 中国科学院大学，北京 10049；
4. 中国科学院南海海洋研究所，海南西沙海洋环境国家野外科学观测研究站，广东 广州 510301
Specific PCR detection for Acanthaster planci larvae and its application
ZHANG Ying1,
YANG Litong2, LIU Bing1,3, ZHENG Fanyu1, LUO
Peng1, CHEN Chang1, 4
1. CAS Key Laboratory of Tropical Marine Bio-resources and Ecology, Guangdong Provincial Key Laboratory of Applied Marine Biology, South China Sea Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou, Guangdong 510301, China
2. China-ASEAN College of Marine Sciences, Xiamen University Malaysia, Sepang, Selangor Darul Ehsan, 43900, Malaysia
3. University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China
4. Xisha Marine Environment National Observation and Research Station, Hainan, South China Sea Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou, Guangdong 510301, China
摘要： 长棘海星（Acanthaster planci）的暴发是导致我国南海乃至印度-太平洋海域珊瑚礁退化的主要原因之一。浮游幼体的密度是决定成体种群是否暴发的重要指标，但是由于幼体肉眼不可见且不易分辨，常规调查和显微镜观察均无法有效检测到自然海域的长棘海星幼体，因此迫切需要开发一种高灵敏性且特异性的长棘海星幼体检测技术。本研究针对长棘海星幼体线粒体细胞色素氧化酶亚基I（mtCOI，mitochondrial cytochrome oxidase subunit I）基因序列，建立了基于聚合酶链式反应（PCR，polymerase chain reaction)的长棘海星幼体特异性检测技术，并对西沙七连屿珊瑚礁海域的长棘海星幼体进行了检测。结果表明，设计筛选的4对特异性引物均可以扩增长棘海星ApmtCOI基因片段，且与蓝指海星、面包海星、粒皮海星和吕宋棘海星没有交叉反应。而且我们发现，在退火温度为58.5℃时，引物2aooniF/2aooniR的特异性最佳，具有较高的灵敏度，可检测到皮克级的长棘海星基因组DNA。我们利用该技术检测了西沙七连屿海域长棘海星幼体分布情况，发现10月底西沙七连屿珊瑚礁海域能检测到长棘海星幼体，且幼体分布并不均匀。因此，该检测技术可作为今后长棘海星幼体种群监测的有效方法。