海洋本草软珊瑚共附生真菌Aspergillus sp. EGF7-0-1中酚酸类化学成分研究(Ⅱ)
樊浩(1994—), 男, 陕西省西安市人, 博士研究生, 研究方向为天然药物化学。email: |
收稿日期: 2022-11-09
修回日期: 2022-11-29
网络出版日期: 2022-12-06
基金资助
广东省自然资源厅专项(GDNRC[2021]048)
广东省自然资源厅专项(GDNRC[2020]039)
国家自然科学基金项目(82273845)
国家自然科学基金项目(81741160)
广东省大学生创新创业项目(S202010572122)
Phenolic acids from soft coral-associated symbiotic and epiphytic fungi Aspergillus sp. EGF7-0-1 (Ⅱ)
Received date: 2022-11-09
Revised date: 2022-11-29
Online published: 2022-12-06
Supported by
Special fund of Guangdong Provincial Department of Natural Resources(GDNRC[2021]048)
Special fund of Guangdong Provincial Department of Natural Resources(GDNRC[2020]039)
National Natural Science Foundation of China(82273845)
National Natural Science Foundation of China(81741160)
Innovation and Entrepreneurship Program for College Students in Guangdong Province(S202010572122)
为寻找海洋来源结构新颖的次生代谢产物, 采用大米培养基对海洋本草软珊瑚(Sinularia sp.)共附生真菌Aspergillus sp. EGF7-0-1进行规模发酵, 利用高效液相色谱等多种柱色谱技术对其乙酸乙酯提取物进行分离纯化; 采用核磁共振波谱、高分辨质谱、旋光光谱等现代光谱学方法, 并结合文献数据比对等对其进行结构鉴定, 获得10个简单芳香酚酸化合物, 分别为4-hydroxy-3-(3'-methyl-2'-butenyl) phenylacetic acid (1)、asperulosin C (2)、对羟基苯乙酸(3)、对羟基苯乙酸甲酯(4)、4-hydroxy-3-prenyl-benzoic acid (5)、4-hydroxy-3-(3-methylbut-2-enyl) benzaldehyde (6)、对羟基苯甲醛(7)、对羟基苯甲酸甲酯(8)、间羟基苯乙酸(9)和2,2'-oxybis(1,4)-ditert-butylbenzene (10), 其中化合物1是新发现的天然产物。抗肿瘤活性研究表明, 化合物1~10对人结肠癌细胞、人乳腺癌细胞、人肝癌细胞、小鼠肝癌细胞、小鼠乳腺癌细胞、小鼠黑色素瘤细胞和小鼠皮肤黑色素瘤细胞等肿瘤细胞均无活性。
关键词: 海洋本草软珊瑚; Aspergillus sp. EGF7-0-1; 酚酸类; 新天然产物; 结构鉴定
樊浩 , 何嘉鸿 , 韦霞 , 陈乐怡 , 陈欣琪 , 张翠仙 . 海洋本草软珊瑚共附生真菌Aspergillus sp. EGF7-0-1中酚酸类化学成分研究(Ⅱ)[J]. 热带海洋学报, 2023 , 42(5) : 171 -177 . DOI: 10.11978/2022241
In order to discover the novel and bioactive secondary metabolites, the soft coral-associated (Sinularia sp.) symbiotic and epiphytic fungi Aspergillus sp. EGF7-0-1 was fermented by using rice medium. The metabolites were isolated by the chromatography technology and high performance liquid chromatography (HPLC). Ten phenolic acids compounds were obtained. According to the 1D and 2D nuclear magnetic resonance (NMR), high resolution electrospray ionization mass spectroscopy (HR-ESI-MS), optical rotatory dispersion (ORD), and comparison with the literature, their structures were determined as 4-hydroxy-3-(3'-methyl-2'-butenyl) phenylacetic acid (1), asperulosin C (2), 4-hydroxyphenylacetic acid (3), methyl 4-hydroxyphenylacetate (4), 4-hydroxy-3-prenyl-benzoic acid (5), 4-hydroxy-3-(3-methylbut-2-enyl) benzaldehyde (6), p-Hydroxybenzaldehyde (7), methyl 4-hydroxybenzoate (8), 3-hydroxyphenylacetic acid (9) and 2,2'-oxybis(1,4)-ditert-butylbenzene (10). Among them, compound 1 was a new natural product. Antitumor activity studies showed that compounds 1~10 were not active against HCT116, MCF7, Huh 7, Hepa 1-6, 4T1, B16 and F10 tumor cells.
表1 试验中使用仪器和试剂信息Tab. 1 Instruments and reagents used in the experiment |
仪器/试剂 | 型号/规格 | 品牌 |
---|---|---|
核磁共振波谱仪 | 400MHz AVANCE Ⅲ型 | 德国 Bruker公司 |
高分辨液质联用仪 | Triple TOFTM 5600+ | 美国 AB SCIEX公司 |
高效液相色谱 | QuikSep半制备型 | 北京慧德易科技有限公司 |
旋转蒸发器 | XHRE-2000A | 上海霄汉实业发展有限公司 |
低温冷却液循环泵 | DLSB-5/20 | 上海霄汉实业发展有限公司 |
单人单面超净工作台 | SW-CJ-1FD | 苏州净化设备厂 |
高压蒸汽灭菌器 | LX-B75L型 | 合肥华泰医疗设备有限公司 |
Kromasil C18半制备柱 | 10mm×250mm, 5μm | 瑞典Akzo Nobel公司 |
常规柱层析硅胶 | 200~300目、300~400目 | 青岛海洋化工厂 |
Sephadex LH-20 | YILIMART 500 G | 瑞典cytiva公司 |
乙酸乙酯、甲醇、等常规试剂 | 分析纯 | 广东光华科技股份有限公司 |
氘代甲醇 | 25 G | 美国剑桥CIT公司 |
葡萄糖 | 分析纯 | 天津致远化学试剂有限公司 |
技术琼脂粉 | 分析纯 | 广东环凯微生物科技有限公司 |
海盐、大米、土豆 | 市场采购 | |
荧光多功能酶标仪 | 美国Beckman Coulter公司 DTX 880 | |
噻唑蓝粉末 | 美国Amresco公司 | |
RPMI-1640培养基 | 美国Gibco公司 | |
DMEM 培养基 | 武汉普诺赛生命科技有限公司 | |
0.25%胰蛋白酶 | 美国Gibco公司 | |
胎牛血清 | 上海依科赛生物制品有限公司 | |
青-链霉素 | 美国Hyclone公司 |
表2 化合物1~5的1H NMR和13C NMR数据表Tab. 2 1H NMR and 13C NMR data of 1~5 in CD3OD |
No. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | ||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
δH, 裂分 (偶合常数) | δC, 类型 | δH, 裂分 (偶合常数) | δC, 类型 | δH, 裂分 (偶合常数) | δC, 类型 | δH, 裂分 (偶合常数) | δC, 类型 | δH, 裂分 (偶合常数) | δC, 类型 | ||
1 | 126.9, C | 126.2, C | 129.0, C | 126.3, C | 123.6, C | ||||||
2 | 6.56, m | 132.9, CH | 6.92, m | 131.3, CH | 7.10, d (8.0) | 131.3, CH | 7.07, d (8.1) | 131.3, CH | 7.76, m | 132.5, CH | |
3 | 129.2, C | 129.3, C | 6.70, d (8.0) | 116.0, CH | 6.72, d (8.1) | 116.3, CH | 129.0, C | ||||
4 | 155.0, C | 155.2, C | 156.9, C | 157.5, C | 160.2, C | ||||||
5 | 6.66, dd (8.2, 2.4) | 115.7, CH | 6.88, dd (8.4, 2.5) | 115.9, CH | 6.70, d (8.0) | 116.0, CH | 6.72, d (8.1) | 116.3, CH | 7.69, dd (8.6, 2.0) | 115.2, CH | |
6 | 6.67, d (8.2) | 131.3, CH | 6.68, d (8.4) | 131.1, CH | 7.10, d (8.0) | 131.3, CH | 7.07, d (8.1) | 131.3, CH | 6.76, d (8.6) | 130.3, CH | |
7 | 3.49, m | 41.6, CH2 | 3.49, m | 41.1, CH2 | 3.69, s | 40.1, CH2 | 3.52, s | 40.9, CH2 | 169.3, C | ||
8 | 176.8, C | 177.2, C | 175.7, C | 174.6, C | |||||||
9 | 3.78, s | 52.4, CH | 3.65, s | 52.4, q | |||||||
1' | 3.07, d (3.3) | 29.2, CH2 | 3.27, d (7.43) | 29.2, CH2 | 3.30, d (1.6) | 29.1, CH2 | |||||
2' | 5.07, m | 124.0, CH | 5.30, m | 123.9, CH | 5.32, m | 123.5, CH | |||||
3' | 132.9, C | 133.1, C | 133.4, C | ||||||||
4' | 17.8, CH3 | 17.8, CH3 | 17.8, CH3 | ||||||||
5' | 25.9, CH3 | 25.9, CH3 | 26.0, CH3 |
表3 化合物6~9的1H NMR和13C NMR 数据表Tab. 3 1H NMR and 13C NMR data of 6~9 in CD3OD |
No. | 6 | 7 | 8 | 9 | ||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
δH, 裂分(偶合常数) | δC, 类型 | δH, 裂分(偶合常数) | δC, 类型 | δH, 裂分(偶合常数) | δC, 类型 | δH, 裂分(偶合常数) | δC, 类型 | |
1 | 122.9, C | 128.9, C | 123.9, C | 6.69, d (8.0) | 123.1, CH | |||
2 | 7.63, m | 132.3, CH | 7.71, d (8.1) | 132.3, CH | 7.56, d (8.2) | 131.3, CH | 132.1, C | |
3 | 130.1, C | 6.89, d (8.1) | 116.0, CH | 6.66, d (8.2) | 115.9, CH | 7.02, d (8.5) | 116.1, CH | |
4 | 163.3, C | 164.3, C | 162.7, C | 156.8, C | ||||
5 | 7.59, dd (8.1, 2.1) | 116.0, CH | 6.89, d (8.1) | 116.0, CH | 6.66, d (8.2) | 115.9, CH | 6.72, m | 114.7, CH |
6 | 6.89, d (8.1) | 130.5, CH | 7.71, d (8.1) | 132.3, CH | 7.56, d (8.2) | 131.3, CH | 7.02, d (8.5) | 129.2, CH |
7 | 9.72, s | 193.1, CH | 9.98, s | 191.1, CH | 165.8, C | 3.51, s | 37.9, CH2 | |
8 | 3.79, s | 52.7, CH3 | 176.2, C | |||||
9 | ||||||||
1' | 3.34, s | 28.9, CH2 | ||||||
2' | 5.34, m | 123.0, CH | ||||||
3' | 134.0, C | |||||||
4' | 17.8, CH3 | |||||||
5' | 25.9, CH3 |
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